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講凱氏定氮儀之前,我們先來認識下蛋白質;蛋白質是有機大分子,是生命活動的主要承擔者。沒有蛋白質就沒有生命。
蛋白質是由氨基酸以“脫水縮合”的方式組成的多肽鏈經過盤曲折疊形成的具有一定空間結構的物質。
一個氨基酸分子的羧基(-COOH)和另一個氨基酸分子的氨基(-NH2)相連接,同時脫去一分子水,形成肽鍵(-NH-CO-),這種方式叫做脫水縮合反應。
凱氏定氮儀的由來,丹麥化學家凱耶達爾(J. Kjeldahl)于1883年提出的濕法定量測定含氮有機化合物中氮的方法。
凱氏定氮法主要用來測定樣品中有機氮含量
有機物即有機化合物。含碳化合物(一氧化碳、二氧化碳、碳酸鹽、金屬碳化物等少數簡單含碳化合物除外)或碳氫化合物及其衍生物的總稱。有機物是生命產生的物質基礎。
有機化合物除少數以外,一般都能燃燒。和無機物相比,它們的熱穩(wěn)定性比較差,電解質受熱容易分解。有機物的熔點較低,一般不超過400℃。
凱氏定氮儀測量樣品蛋白質含量主要經過三個步驟;
第一步:消解 目的是將有機物中的胺根在高溫和催化劑CuSO4,濃H2SO4 作用下反應,生成(NH4)2SO4
反應方程式:
2NH2-+H2SO4+2H+=(NH4)2SO4
第二步 蒸餾 目的是將消解完成的樣品在凱氏定氮儀中與堿發(fā)生反應,通過蒸餾釋放出NH3 ;
反應方程式:
(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4
反應完成后,用H3BO3 溶液收集蒸餾釋放出NH3,
反應方程式:
2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
第三步 滴定 目的是將收集的NH3通過已知含量的標準酸滴定,反算出NH3的含量;
反應方程式:
(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3
單位注解:
N:樣品中蛋白質的百分含量;
V:樣品消耗硫酸或鹽酸標準液的體積,ml;
V空白:試劑空白消耗硫酸或鹽酸標準溶液的體積,ml;
C:硫酸或鹽酸標準溶液的當量濃度
M:稱量樣品的重量,g;
氮含量計算公式:
蛋白質轉換系數:
(1)一切蛋白質都含N元素,且各種蛋白質的含氮量很接近,平均為16%;
(2)蛋白質系數:任何生物樣品中每1g元N的存在,就表示大約有1/16%=6.25g蛋白質的存在, 6.25常稱為蛋白質常數
凱氏定氮儀的原理大致就是以上所述;那么凱氏定氮儀適合在什么環(huán)境下工作呢?需要一個正規(guī)的化學實驗室
1、電源電壓:AC 220V±10% 50Hz;
2、自來水壓力:0.02MPa-1MPa;
3、環(huán)境溫度:室溫——35℃;
了解更多詳細內容,推薦參考定氮儀視頻教程。